試劑及用品
1.預(yù)包被板條48/96T; 6.樣本稀釋液(5號液)1支;
2.酶結(jié)合物(1號液)1支; 7.終止液(6號液)1支;
3.洗滌液(2號液)1支; 8.陽性對照血清1支;
4.底物(3號液)1支; 9.陰性對照血清1支;
5.顯色液(4號液)1支; 10.使用說明書1份;
操作方法
1.樣本稀釋：用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清按1:100稀釋。陰、陽對照不用稀釋,直接加樣。
2.加樣反應(yīng)：樣本檢測孔每孔分別加已稀釋樣本血清100ul。同時設(shè)陰性、陽性及空白對照各1孔，取陰性、
陽性對照各100ul分別加入反應(yīng)孔內(nèi)，空白對照孔僅加入100ul樣本稀釋液(5號液)。37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體，每孔加洗滌液(2號液)1滴，立即用蒸餾水注滿，靜置30秒后甩去，再直接用蒸餾水洗滌四次，每次均需靜置30秒，*后一次甩去，拍干。
3.加酶反應(yīng)：除空白對照孔外其余每孔加酶結(jié)合物(1號液)2滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘后甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。
4.顯色反應(yīng)：每孔加底物(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴，混勻，終止反應(yīng)（加終止液后藍(lán)色會變?yōu)辄S色）。
結(jié)果判斷
1.肉眼觀察：陰性對照接近無色，陽性對照呈明顯黃色，表示實(shí)驗(yàn)有效。待檢孔接近無色表示該標(biāo)本為陰性，待檢孔呈明顯黃色表示該標(biāo)本為陽性。
2.儀器判斷：以空白對照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（620nm作參比波長）讀取O.D值。待檢孔O.D值大于陰性對照2.1倍者為陽性。當(dāng)陰性對照O.D值低于0.07時按0.07計(jì)算。
注意事項(xiàng)
1.試劑盒在2-8℃下保存,有效期六個月。，每次取出時先平衡至室溫后使用。滴瓶每次用后一定要將蓋擰緊，各瓶蓋之間切不可混用。各試劑盒之間不可混用。
2.洗滌時將蒸餾水加滿各孔，每次停放三十秒鐘，甩去孔內(nèi)液體。禁用自來水等其它水源。
3.為提高實(shí)驗(yàn)的可比性建議使用儀器判讀結(jié)果，并對陰性對照測復(fù)孔以減少誤差。
